耗材專區 | 全自動凝膠淨化-高效液相色譜法測定食用油中膽固醇含量

前言

膽固醇是動物源性食品中常見的成分，而人類過多食用膽固醇則會引發動脈粥樣硬化、高血壓、冠心病等一係列心血管疾病以及風濕性關（guān）節炎、癌症、糖尿病和帕金森等疾病。據（jù）文獻報道，食用植物油中一般不含或含有極少量的膽固醇，而（ér）動植物組織中通常都含有甾醇，動物油脂的特征性甾醇是膽固醇（chún）。因此，可以通過檢測食用植物油（yóu）中的膽固醇含量來判定（dìng）植物油中是否含有動物油脂，從而推斷植物油中是否（fǒu）混有地溝油（yóu）。

目前常用的膽固醇樣品提（tí）取淨化方（fāng）法主要是皂化法。而采用（yòng）凝（níng）膠滲透色譜（GPC）進行樣品前處理的報道還很罕見。本實驗采用LabTech AutoClean全自動凝膠淨化係（xì）統對植物油提取液進行淨化，根據（jù）分（fèn）子排阻色譜原理可有效去除植物油中大（dà）分子基體（tǐ）幹擾物質，氮（dàn）吹濃縮後，采用HPLC進行檢測，方法簡單、快（kuài）捷，能夠很好地去（qù）除幹擾物對目標物的影響。

1、實驗過程

1.1 儀器與試劑

AutoClean全自動凝膠淨化係統，北京萊伯（bó）泰科儀器（qì）股份有限公司；

S-X3不鏽（xiù）鋼凝膠淨（jìng）化柱（20*300mm），貨號：Y020207015，北京萊伯帕（pà）茲檢測科技有限公司；

LC600二元高壓（yā）梯（tī）度高效液相（xiàng）色譜係統，北京.17c嫩嫩草色视频蜜 %A儀器股份有限公司；

E.T.氮吹（chuī）濃（nóng）縮儀，貨（huò）號：C020017，北京萊伯帕茲檢測科技有限公司；

甲（jiǎ）醇（色譜純），購自賽（sài）默（mò）飛世爾科技（中（zhōng）國）有限公司；

乙酸乙酯（色譜純），購自賽默飛世（shì）爾科技（中國）有限公司；

環己烷（wán）（色譜純），購自賽默飛世（shì）爾科技（中國）有限公（gōng）司。

1.2 工作液配製

膽固（gù）醇標準使（shǐ）用溶液（yè）：10mg/mL，溶劑為乙醇，購（gòu）自壇墨質檢標準物質中心；

膽固醇標準（zhǔn）工作液：取1.0mL的標準儲備液於10mL的容量（liàng）瓶（píng）中，用乙醇定容，得到濃度為1.0mg/mL的標樣工作液；

分別移取1.0mg/mL的膽固醇標準工（gōng）作液0.01、0.02、0.05、0.1、0.2mL各置於（yú）1.0mL容量（liàng）瓶中，用乙醇定容至刻（kè）度，得到濃度為10、20、50、100、200μg/mL的（de）標準曲線。

1.3 實驗部分

1.3.1 樣品製備

稱取（qǔ）0.5g食用油於50mL離心管中，加（jiā）入10mL乙酸乙酯-環己烷（1:1）混合溶液，旋渦震蕩後，將溶液轉移至AutoClean全自動（dòng）凝膠淨化係統的（de）進樣瓶中。

1.3.2 凝膠淨化處理

將（jiāng）1.3.1中（zhōng）裝有提取液的進樣瓶放置在AutoClean全自動凝（níng）膠（jiāo）淨化係統的平（píng）台上，以等體積的乙酸乙酯和環己烷混合溶液為流動相，流（liú）速：5mL/min；紫外檢測波長254nm；收（shōu）集8～16min餾分於60mL收集瓶中，開始凝膠淨化，淨化後將60mL收集瓶移至ET濃縮儀中，40℃氮吹至近幹，加入1mL乙醇充分溶解（jiě），待檢測。

1.3.3 LC分析測定條件

色譜柱：C18，柱長250mm，內徑4.6mm，粒徑5μm；

流動相：甲醇；

流速：1.0mL/min；

紫外檢測器：檢測波長205nm；

柱溫：40℃；

進樣（yàng）量：20μL。

2、       實驗結果

圖1 膽固醇標準混合溶液的色譜圖

圖2 大豆油加（jiā）標色譜圖（tú）

圖3 玉米胚芽油加標色（sè）譜圖

3、       結論

本實（shí）驗使用S-X3不鏽（xiù）鋼凝膠淨化柱（20*300mm）（北京萊伯帕茲檢測科技有限（xiàn）公司，貨（huò）號：Y020207015）對植物油中膽固醇提取液進行淨化，回收率在（zài）88.8%~97.9%之間，RSD為1.5%~3.6%，回收率高、重現性良好（hǎo），說明S-X3不鏽鋼凝膠淨化柱（20*300mm）適用於植物油中膽固醇測定的樣品淨化處理，並且結果（guǒ）穩定、可靠。

4、       參考（kǎo）文獻

[1] GB 5009.128-2016 食品安全（quán）國家標準 食品中膽固醇的測定 高效液相色譜法

[2] DB34/T 1765-2012 動物油脂中膽固醇含量的測定 液相色譜串聯質譜法（fǎ）