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選購高效液相色譜(pǔ)柱的方法

更新時間(jiān):2020-04-03       點擊次數:6436
 目前在高效液相色譜中,分離效果好壞的一個重(chóng)要指針是色譜填料的正確選擇,主要涉(shè)及到以下幾種填料:

1)矽膠基質填料

1、正相色譜正相色譜用的固定相通常為矽膠(Silica)以及其(qí)它具有極性官能團,如胺基和氰(qíng)基的鍵合相填料。由於矽膠表麵(miàn)的矽羥基或其它極性基團極性較(jiào)強(qiáng),因此,分離(lí)的次序是依據樣品(pǐn)中(zhōng)各組分的極性大小,即極性較弱的組份*先被(bèi)衝洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如正己烷,氯*,二氯(lǜ)甲烷等。

2、反向色譜反向色譜用的填料常是以矽膠為基質,表麵鍵合(hé)有(yǒu)極性相對(duì)較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強,通常為水、緩衝液與甲醇(chún)、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是(shì)極性較強的組分*先被衝洗出,而極性較弱的組分在色譜柱上有更強的保(bǎo)留(liú)。常用(yòng)的反向填料(liào)有C18、C8、C4等。

2)聚合物填料

聚合物填料多(duō)為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等,其重(chóng)要優點是在PH值為1-14均可使用。相對於矽膠基質的(de)C18填料,這類填料具有更(gèng)強的疏水性;大孔的聚合物對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有(yǒu)效。現有(yǒu)的聚合特填料的缺點(diǎn)是(shì)相對矽膠(jiāo)基質填料,色譜柱柱效較低。

3)其它無機填料

其它HPLC的無機(jī)填料色譜(pǔ)柱也已經商品化,由於其特(tè)殊的(de)性質(zhì),一般僅限於特殊(shū)的用(yòng)途。如石墨化碳黑正逐漸成為反向(xiàng)色譜柱填料。這種填料的(de)分離不同於矽膠基質烷(wán)基鍵合相,石(shí)墨(mò)化碳的表(biǎo)麵即是保留的基礎,不(bú)再需其它的表麵改性。該柱填料一般比(bǐ)烷基鍵合相矽膠或多孔(kǒng)聚合物填料的保留能力更強。石(shí)墨化碳可用於(yú)分離某些幾何(hé)異構(gòu)體,由(yóu)於在HPLC流動相中不會被溶解,這類柱可(kě)在任何(hé)PH與溫度下使用。氧化鋁也可(kě)以用於HPLC。氧化鋁微(wēi)粒剛性強,可製成穩定的色譜柱柱床,其優點是可以在PH高達12的流動相中使用。但由於氧化鋁與堿性化(huà)合物的作用也很強,應用(yòng)範圍受到一定限製,所以未能廣(guǎng)泛應用。新(xīn)型色譜氧化鋯基質填料也(yě)可用於HPLC。商品化的隻有聚全物塗層的(de)多孔氧化鋯微球色譜柱,應用PH1-14,溫(wēn)度可達100℃。由於氧化鋯填料是近幾年才開始研究,加之麵(miàn)臨的(de)實驗難度,其重要用途與優勢尚在進行之中。 
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